Alteraciones en la traducción

En humanos, la deficiencia de GALT típicamente resulta de una mutación en el gen que codifica la enzima GALT. La mutación más común en seres humanos implica una mutación puntual en el residuo de aminoácido 188, haciendo que un residuo de glutamina se traduzca como un residuo de arginina. El desplazamiento de la glutamina, un aminoácido moderadamente hidrófilo, con arginina, un aminoácido básico cargado positivamente, da como resultado un cambio en la carga y por lo tanto la conformación enzimática sólo dos residuos lejos del sitio activo de la enzima, conduciendo a la inactividad de la enzima.

La mutación X380R, que rompe el codón de parada del gen GALT, provoca el alargamiento de la cadena proteica de la enzima GALT. 

Una supresión de cuatro nucleótidos en el extremo 5 ' Promotor, en una posición de 116 - 119 nucleótidos upstream del codón iniciador (5'UTR - 119delGTCA).

El ARN total y el ARNm de un sujeto heterocigoto X380R tiene los siguientes cebadores: RT4.1A (5 ' CCC AGT GAT CAT CCC CTT TTC 3 ') y 11B (5' TGC TAT ATC TGC CCA AAT TCC 3 ').

RT-PCR amplificado se añadió a una mezcla de PCR que contiene cebadores RT5.2APTT ( 5 'GGA TCC TAA TAC GAC TCA CTA TAG GAA CAG ACC ACC ATG TCG GAT GTA ACG CTG CCA CT 3 ') y 11B (mencionadas anteriormente, situadas en la región 3'UTR muy próxima a la señal de poliadenilación). 

El producto T7-PCR anidado no purificado se usó para la reacción de transcripción / traducción in vitro con 35 S-metionina. Los productos de traducción se gelificación, calentaron, se separó en gel, se secó y la señal se detectó por autorradiografía.

Existen mutaciones en los exones 1-4, 6, 8-9 y 11 del gen GALT.

Se observaron patrones de banda anormales en los exones 2, 8 y 9. Después de la secuenciación de los exones 2 y 8, se produjeron nuevas mutaciones.
Fueron identificados: L74fsdelCT debido a la deleción de CT en el codón 74 y L256 / P257delGCC debido a la supresión de GCC en Codones 256 y 257. El análisis secuencial del exón 9 reveló la mutación K285N (AAG cambia por AAT)

Bibliografía

http://www.fnbrno.cz/data/files/IHOK%20-%20CMBGT/35%20-%20Hum%20Mut%202000%20GAL%20Kozak.pdf
http://digitalcommons.liberty.edu/cgi/viewcontent.cgi?article=1450&context=honors